Содержание
- Колифаг — инструкция по применению, аналоги, отзывы и формы выпуска (раствор для приема внутрь, местного и наружного применения) лекарства для лечения вызванной кишечной палочкой коли-инфекции у взрослых, детей и при беременности. Состав
- Определение колифагов.
- МУК 4.2.1018-01 Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды (с Изменением N 1)
- 1. Область применения
- 2. Нормативные ссылки
- 3.1. Общие требования к отбору проб
- 3.2. Хранение и транспортирование проб
- 4. Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды
- 4.2. Расходные материалы
- 4.3. Химические реактивы
- 4.4. Питательные среды
- 4.5. Тест-культуры микроорганизмов
- 5. Приготовление питательных сред и реактивов
- 5.2. Питательный бульон
- 5.3. Питательный агар
- 5.4. Фуксин-сульфитная среда Эндо
- 5.5. Лактозо-пептонная среда
- 5.6. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа
- 5.7. Реактивы для оксидазного теста
- 5.8. Железо-сульфитный агар
- 5.9. Реактивы для окраски препаратов по Граму
- 6.1. Подготовка посуды и материалов
- 6.2. Подготовка проб воды
- 7.2. Подготовка фильтровального аппарата
- 7.3. Фильтрование воды
- 8.1. Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре
- 8.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)
- Коли-фаги как индикаторы вирусного загрязнения питьевой воды
- ПЛАН
- ВВЕДЕНИЕ
- 1. ДАННЫЕ ЗАРУБЕЖНЫХ И ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО ДАННОЙ ПРОБЛЕМЕ
- 2. АНАЛИЗ ИССЛЕДОВАНИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ И ВОДЫ БАССЕЙНОВ, ПРОВЕДЕННЫХ В ЦЕНТРАЛИЗОВАННОЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ ЗА 2008-2010 ГГ.
- ЗАКЛЮЧЕНИЕ
- СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
- Введение
- Одной из актуальных проблем в настоящее время является обеспечение населения доброкачественной питьевой водой, что обусловлено неуклонным ростом водопотребления, качественными изменениями водоисточников, подвергающихся практически неконтролируемому антропогенному воздействию. В этих условиях чрезвычайно важное значение приобретает своевременный и адекватный контроль за качеством питьевой воды в отношении вирусного загрязнения.
- Известно, что оценка качества питьевой воды с использованием традиционных бактериальных индикаторов в отношении вирусного загрязнения не всегда надежна, что зачастую приводит к неверной оценке эпидемической ситуации. Многочисленные исследования, проведенные за рубежом и в нашей стране свидетельствуют, что рутинные бактериологические анализы недостаточны для оценки безопасности питьевой воды в отношении вирусного загрязнения.
- 1. Данные зарубежных и отечественных исследований по данной проблеме
- В исследованиях P. Paument и соавторов, проведенных на 7 водопроводных станциях в Канаде, показано отсутствие корреляции между обнаружением в очищенной питьевой воде энтеровирусов и бактериальных индикаторов: 7% проб питьевой воды, отвечающей бактериальным стандартам, содержат вирусы коксаки В3, В4, ЕСН07. Аналогичные результаты были получены и рядом отечественных исследователей .
- Одновременно с усовершенствованием методов прямого вирусологического контроля качества воды, являющихся в достаточной степени дорогостоящими и сложными, исследователи разных стран изучали возможность контроля вирусного загрязнения с помощью косвенных индикаторных микроорганизмов. Основываясь на устойчивости различных представителей микрофлоры к факторам окружающей среды и дезинфекционным средствам, а также учитывая наличие других признаков, необходимых для санитарно-показательных микроорганизмов в качестве индикаторов вирусного загрязнения было предложено использовать следующие альтернативные показатели: фекальные стрептококки, коли-фаги, вирус полиомиелита, клостридии и др. Однако из указанных микроорганизмов только коли-фаги соответствовали требованиям, предъявляемым к индикаторным микроорганизмам, в частности, коли-фаги:
- — не патогенны и безопасны для человека;
- — имеют единый с энтеровирусами источник поступления в окружающую среду;
- — по размерам, строению и физико-химическим свойствам, по устойчивости к факторам окружающей среды и дезинфектантам они наиболее близки к энтеровирусам;
- — обнаруживаются по всех объектах, где обнаруживаются кишечные вирусы;
- — не размножаются в воде:
- — концентрации коли-фагов превышают таковые энтеровирусов;
- — методы выделения коли-фагов просты, надежны и доступны любой практической бактериологической лаборатории.
- В последующие годы на основании экспериментальных исследований и натуральных наблюдений ряд ученых подтвердили, что коли-фаги являются более адекватными индикаторами вирусного загрязнения, чем БГКП (ОКБ). Особенно четко индикаторное значение коли-фагов в отношении вирусного загрязнения было показано на водопроводных станциях Среднеазиатского региона . На примере 2 водопроводных станций было установлено, что в воде, обработанной по 2-этапной схеме с использованием обеззараживания дозами хлора в соответствии с требованиями ГОСТа 2874-82 «Вода питьевая», наблюдалось интенсивное устранение бактериального загрязнения (в 100 000 раз от исходного), а содержание коли-фагов уменьшилось всего в 10-15 раз. При этом на фоне выделения коли-фагов в воде, стандартной по бактериологическим показателям, обнаруживались энтеровирусы. При низком исходном уровне загрязнения обработанная вода не содержала вирусов и коли-фагов.
- Санитарно-бактериологические и эпидемиологические исследования, проведенные НИИЭЧ и ГОС им А.М. Сысина в городах, расположенных в разных природно-климатических зонах, показали, что динамика изменения процента нестандартных проб по коли-индексу не отражает уровня вирусной контаминации питьевых вод и их эпидемиологической безопасности в отношении возбудителей кишечных вирусных инфекции Статистическая обработка данных исследований выявила наличие прямой достоверной связи между содержанием коли-фагов и энтеровирусов (r = 0,4 при … < 0.05) и отсутствие связи между к/индексом и наличием энтеровирусов (r = 0,03 при … > 0,05). Выявлена прямая достоверная корреляционная связь между процентом выделяемости коли-фагов в питьевой воде, энтеровирусов и уровнем заболеваемости населения вирусным гепатитом А (r = 0,78; … < 0,05). В то же время отсутствует достоверная корреляционная связь между уровнями к/индекса и заболеваемостью вирусным гепатитом А (r == 0,0124 при … >0,05).
- С учетом вышеизложенного коли-фаги в качестве индикатора вирусного загрязнения воды вошли в ряд методических и нормативных документов водно-санитарного законодательства.
- Итак, коли-фаги — это бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при t° = (37±1)°С через (18±2) ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.
- Определение коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Исследование проводится титрационным методом. По эпидемическим показаниям параллельно проводят прямой метод выделения коли-фагов.
- Согласно Сан-Пиц 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем водоснабжения. Контроль качества» п.4.3.1 — «При исследовании микробиологических показателей качества питьевой воды в каждой пробе проводится определение ТКБ, ОКБ, ОМЧ и коли-фагов». При этом в п.4.3 данных Сан-Пин: «безопасность питьевой воды в эпидемическом отношении определяется её соответствием нормативам по микробиологическим показателям, представленным в табл. № 1, где исследование на наличие коли-фагов определяется только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть. Поскольку г. Биробиджан снабжается питьевой водой из подрусловых вод (подземные водоисточники), то согласно п.4.3 мы не должны исследовать питьевую воду на данный показатель, что в свою очередь противоречит п.4.3.1. Данное противоречие было разрешено, когда было издано информационно-методическое письмо по контролю качества питьевой воды № 1100/1670-98-111 от 24.07.98г., в которое были внесены уточнения к примечанию «3»: «определение проводится в системах водоснабжения из поверхностных и подземных источников перед подачей воды в распределительную сеть, а коли-фаги — еще и в сети». Таким образом, исследования из источников водоснабжения проводились на соответствие Сан-Пин 2.1.4.559-96 на показатели согласно п.4.3.1.
- Но в 2002г. в работу поступил Сан-Пин 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем водоснабжения. Контроль качества», отменяющий предыдущий. И в данном документе противоречие было сохранено. А так как вышедший следом МЦК 4.2.1018-1 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды» от 01.07.02 отменил МЦК 4.2.671-97 и информационное письмо № 1100/1670-98-111, но вопрос остается открытым и в настоящее время.
- На данный момент времени контроль исходного уровня загрязнения на источниках водоснабжения проводится в собственных лабораториях (согласно программе производственного контроля), а также осуществляется Госсанэпиднадзор согласно ГОСТ 2761-84, а исследование воды перед подачей её в распределительную сеть и в сети на соответствие Сан-Пин 2.1.4.1074-01 на следующие показатели: ОКБ, ТКБ, ОМЧ и коли-фаги.
- 2. Анализ исследования питьевой воды и воды бассейнов, проведенных в централизованной бактериологической лаборатории за 2008-2010 гг.
- Мною были также проанализированы результаты исследований воды бассейнов, т.к. качество пресной воды, поступающей в ванну бассейна должно отвечать гигиеническим требованиям к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения вне зависимости от принятой системы водообеспечения и характера водообмена. Качество воды плавательных бассейнов по санитарно-микробиологическим показателям регламентируется Сан-Пин 2.1.2.568-98 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов». Основными микробиологическими показателями являются: колиформпые бактерии, ТКБ, коли-фаги, лецитиназоположительный стафилококк.
- При проведении исследований воды бассейнов нашей лабораторией за последние 3 года не было выявлено случаев, когда бы выделение коли-фагов не сопровождалось бы выделением колиформных бактерий (таб. 2). Возможно, это частично объясняется тем, чтo г. Биробиджан снабжается водой питьевой из подземных подруслопых вод, уровень загрязнения которых обычно ниже, чем поверхностных источников водоснабжения.
- В апреле 2010 года при исследовании воды из распределительной сети в нашей лаборатории был получен следующий результат: выделены коли-фаги при соответствии данной пробы воды по остальным показателям, нормированным Сан-Пин 2.1.4.1074-01 (табл. № 1)
- Это подтверждает теорию о том, что в результате обработки и обеззараживания водопроводной воды хлором или УФО в установленных режимах, как правило, устраняется бактериальное загрязнение, а более устойчивые формы микроорганизмов (в первую очередь вирусы) могут сохраняться и попадать в распределительную сеть.
- Данный результат мы получили в апреле, когда происходит массивное таяние снега и исходный уровень загрязнения источников водоснабжения естественно повышается, что привело к возможности прохождения коли-фагов в распределительную сеть после обработки воды.
- Исследование воды распределительной сети на наличие коли-фагов и ОКБ 2008г.
- Таблица № 1
- 2009г.
- таблица № 2
- 2010г.
- Исследование воды бассейнов на наличие коли-фагов и колиформн. бактерий 2008г.
- Таблица № 4
- 2009г.
- Таблица № 5
- К сожалению, мы не можем проследить взаимосвязь между выделением коли-фагов и энтеровирусов, так как для этого необходимо производить забор воды параллельно из одних и тех же точек отбора проб и в одно время.
- вирусологический контроль качество загрязнение вода
- Заключение
- Таким образом, данные литературы и результаты собственных исследований воды свидетельствуют, что осуществление контроля за качеством питьевой водопроводной воды прошедшей обработку и обеззараживание, только по бактериологическим индикаторам недостаточно. При обработке воды в пределах, установленных режимов полностью устраняется бактериальное загрязнение, показатели бактериальных индикаторов достигают нормативов. Однако устойчивые формы микроорганизмов, в том числе коли-фаги, энтеровирусы могут проходить через барьер водоподготовки и попадать в распределительную сеть.
- В условиях затруднительного для практических служб обеспечения прямого вирусологического контроля качества воды разработаны более адекватные индикаторы вирусного загрязнения — коли-фаги, которые в большей мере отвечают требованиям обеспечения эпидемической безопасности водопроводной воды в отношении вирусов. Для определения коли-фагов не требуется дорогостоящего оборудования, сроки проведения анализа 1-2 суток, методика проста и доступна для любой практической лаборотории.
- Список использованных источников
- 1. Багдасарьян Г.А., Недачин А.Е., Мышляева Л.А. и др.// Гигиена и санитария, 1983, №4, стр.9-12.
- 2. Дмитриева Р.А. // Гигиена и санитария, 1988, № 8, стр.56-59.
- 3. Недачин А.Е., Доскина Т.В., Дмитриева Р.А. и др. // Гигиена и санитария, 1993, № 10, стр.23-25.
- 4. Недачин А.Е., Доскина Т.В., Дмитриева Р.А. и др.// Гигиена окружающей среды, М., 1990, стр.76-81.
- 5. Недачин А.Е., Доскина Т.В., Дмитриева Р.А. и др.// Гигиена и санитария, 1996, № 5, стр.3-6.
- 6. Сан.Пин 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».
- 7. МЦК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».
- 8. МЦК 4.2.671-97 «Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды».
- 9. Сан.Пин 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества».
- 10. Сан.Пин 2.1.2.568-96 «Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов».
- 11. Информационно-методическое письмо по контролю качества питьевой воды № 1100/1670-98-111 от24.07.98г.
- Размещено на Allbest.ru
Колифаг — инструкция по применению, аналоги, отзывы и формы выпуска (раствор для приема внутрь, местного и наружного применения) лекарства для лечения вызванной кишечной палочкой коли-инфекции у взрослых, детей и при беременности. Состав
В данной статье можно ознакомиться с инструкцией по применению лекарственного препарата Колифаг. Представлены отзывы посетителей сайта — потребителей данного лекарства, а также мнения врачей специалистов по использованию Колифага в своей практике. Большая просьба активнее добавлять свои отзывы о препарате: помогло или не помогло лекарство избавиться от заболевания, какие наблюдались осложнения и побочные эффекты, возможно не заявленные производителем в аннотации. Аналоги Колифага при наличии имеющихся структурных аналогов. Использование для лечения вызванной кишечной палочкой коли-инфекции кожи и внутренних органов у взрослых, детей, а также при беременности и кормлении грудью. Состав препарата.
Колифаг — препарат, обладающий способностью специфически лизировать бактерии энтеропатогенной кишечной палочки.
Состав
Бактериофаг коли + вспомогательные вещества.
Показания
Лечение и профилактика заболеваний, вызванных бактериями Escherichia coli (кишечная палочка), в составе комплексной терапии:
- заболевания уха, горла, носа, дыхательных путей и легких (синусит, отит, ангина, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, пневмония, плеврит — воспаление плевры);
- хирургические инфекции (нагноения ран, ожоги, абсцесс, флегмона, фурункулы, карбункулы, гидраденит, панариции, парапроктит, мастит, бурсит, остеомиелит);
- урогенитальные инфекции (уретрит, цистит, пиелонефрит, кольпит, эндометрит, сальпингоофорит);
- энтеральные инфекции (гастроэнтероколит, холецистит), дисбактериоз кишечника;
- генерализованные септические заболевания;
- гнойно-воспалительные заболевания новорожденных (омфалит, пиодермия, конъюнктивит, гастроэнтероколит, сепсис и другие);
- другие заболевания, вызванные кишечной палочкой.
С профилактической целью препарат используют для обработки послеоперационных и свежеинфицированных ран, а также для профилактики внутрибольничных инфекций по эпидемическим показаниям.
Формы выпуска
Раствор для приема внутрь, местного и наружного применения во флаконах 20 мл и 100 мл.
Инструкция по применению и режим дозирования
Препарат Колифаг используют для приема внутрь перорально, ректального введения, аппликаций, орошений, введения в полости ран, влагалища, матки, носа, пазух носа и дренированные полости.
Лечение гнойно-воспалительных заболеваний с локализованными поражениями должно проводиться одновременно как местно, так и приемом препарата внутрь в течение 7-20 дней (по клиническим показаниям).
В случае, если до применения Колифага для лечения ран применялись химические антисептики, рана должна быть тщательно промыта стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида.
В зависимости от очага инфекции Колифаг применяют в виде орошения, примочек и тампонирования в объеме до 200 мл в зависимости от размеров пораженного участка. При абсцессе после удаления гнойного содержимого с помощью пункции препарат вводят в количестве меньшем, чем объем удаленного гноя. При остеомиелите после соответствующей хирургической обработки в рану вливают бактериофаг по 10-20 мл.
При введении Колифага в полости (плевральную, суставную и другие ограниченные полости) до 100 мл оставляют капиллярный дренаж, через который бактериофаг вводят в течение нескольких дней.
При циститах, пиелонефритах, уретритах препарат принимают внутрь. В случае, если полость мочевого пузыря или почечной лоханки дренированы, бактериофаг вводят через цистостому или нефростому 1-2 раза в день по 20-50 мл в мочевой пузырь и по 5-7 мл в почечную лоханку.
При гнойно-воспалительных гинекологических заболеваниях препарат вводят в полость вагины, матки в дозе 5-10 мл ежедневно однократно, при кольпите — по 10 мл орошением или тампонированием 2 раза в день. Тампоны закладывают на 2 часа.
При гнойно-воспалительных заболеваниях уха, горла, носа препарат вводят в дозе 2-10 мл 1-3 раза в день. Бактериофаг используют для полоскания, промывания, закапывания, введения смоченных турунд, оставляя их на 1 час.
При энтеральных инфекциях, дисбактериозе кишечника препарат принимают внутрь 3 раза в день за 1 час до приема пищи в течение 7-20 дней по клиническим показаниям. Возможно сочетание двукратного приема внутрь с однократным ректальным введением разовой возрастной дозы бактериофага в виде клизмы после опорожнения кишечника.
Побочное действие
Не установлено.
Противопоказания
- гиперчувствительность к компонентам препарата.
Применение при беременности и кормлении грудью
Применение препарата Колифаг при беременности и в период кормления грудью возможно при наличии у женщины инфекций, вызванных фагочувствительными штаммами кишечной палочки (по рекомендации врача).
Применение у детей
Применяют по показаниям в соответствии с режимом дозирования.
Для детей в возрасте от 0 до 6 месяцев разовая доза Колифага составляет 5 мл при приеме внутрь и 5-10 мл в клизме. Для детей от 6 до 12 месяцев — 10 мл и 10-20 мл соответственно, от 1 года до 3 лет — 15 мл и 20-30 мл, от 3 до 8 лет — 15-20 мл и 30-40 мл, от 8 лет и старше — 20-30 мл и 40-50 мл соответственно.
Применение Колифага у детей в возрасте до 6 месяцев
При сепсисе, энтероколите новорожденных, включая недоношенных детей, Колифаг применяют в виде высоких клизм (через газоотводную трубку или катетер) 2-3 раза в сутки в дозе 5-10 мл. При отсутствии рвоты и срыгивания возможно применение препарата через рот. В этом случае он смешивается с грудным молоком. Возможно сочетание ректального (в виде высоких клизм) и перорального (через рот) применения Колифага. Курс лечения 5-15 дней. При рецидивирующем течении заболевания возможно проведение повторных курсов лечения. С целью профилактики сепсиса и энтероколита при внутриутробном инфицировании или опасности возникновения внутрибольничной инфекции у новорожденных детей Колифаг применяют в виде клизм 2 раза в день в течение 5-7 дней.
При лечении омфалита, пиодермии, инфицированных ран препарат Колифаг применяют в виде аппликаций ежедневно двукратно (марлевую салфетку смачивают бактериофагом и накладывают на пупочную ранку или пораженный участок кожи).
Применение у пожилых пациентов
Пациентам пожилого возраста снижения дозы не требуется.
Особые указания
Перед использованием флакон с Колифагом необходимо взболтать и просмотреть. Препарат должен быть прозрачным и не содержать осадка. При помутнении препарат не применять.
Вследствие содержания в препарате питательной среды, в которой могут развиваться бактерии из окружающей среды, вызывая помутнение препарата, необходимо при вскрытии флакона соблюдать следующие правила:
- тщательно вымыть руки;
- обработать колпачок спиртсодержащим раствором;
- снять колпачок, не открывая пробки;
- не класть пробку внутренней поверхностью на стол или другие предметы;
- не оставлять флакон открытым;
- вскрытый флакон хранить только в холодильнике.
Вскрытие флакона с Колифагом и извлечение необходимого объема препарата может проводиться стерильным шприцем путем прокола пробки.
Препарат из вскрытого флакона при соблюдении условий хранения, выполнении вышеперечисленных правил и отсутствии помутнения может быть использован в течение всего срока годности.
Лекарственное взаимодействие
Применение Колифага не исключает использования других антибактериальных препаратов.
Аналоги лекарственного препарата Колифаг
Структурные аналоги по действующему веществу:
- Бактериофаг коли;
- Бактериофаг коли жидкий.
Аналоги препарата Колифаг по фармакологической группе (вакцины, сыворотки, фаги и анатоксины):
- Бактериофаг брюшнотифозный в таблетках с кислотоустойчивым покрытием;
- Бактериофаг дизентерийный поливалентный;
- Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный;
- Бактериофаг коли;
- Бактериофаг коли жидкий;
- Бактериофаг колипротейный;
- Бактериофаг протейный;
- Бактериофаг протейный жидкий;
- Бактериофаг псевдомонас аэругиноза (синегнойный);
- Бактериофаг сальмонеллезный групп A, B, C, D, E;
- Бактериофаг стафилококковый;
- Интести-бактериофаг жидкий;
- Интести-бактериофаг;
- Пиобактериофаг комплексный;
- Пиобактериофаг поливалентный очищенный;
- Пиополифаг;
- Протеофаг;
- Секстафаг;
- Стафилофаг;
- Стрептофаг;
- Фагогин Гель с бактериофагами;
- Фагодент Гель с бактериофагами для десен;
- Фагодерм Гель с бактериофагами для проблемной кожи.
Отзыв врача хирурга
При возросшем в последние годы количестве инфекций, вызванных кишечной палочкой, все чаще приходится прибегать к использованию препарата Колифаг. В нашем «гнойном» отделении лежат больные с остеомиелитами, флегмонами, парапроктитами, абсцессами. Если возбудитель инфекции чувствителен к Колифагу, препарат работает на отлично. Никогда в нашей практике не было побочных реакций ни на местное применение Колифага, ни на ректальное или внутриполостное его введение. Препарат переносится хорошо. Важно и то, что его можно назначать одновременно с другими антибактериальными средствами, что необходимо в тех случаях, когда возбудителем гнойного процесса является смешанная флора.
При отсутствии аналогов лекарства по действующему веществу, можно перейти по ссылкам ниже на заболевания, от которых помогает соответствующий препарат, и посмотреть имеющиеся аналоги по лечебному воздействию.
Цели и задачи санитарно-микробиологического исследования воды. Поскольку вода используется при производстве любого вида продукции, а также непосредственно в пищу, соответствие ее качества санитарно- микробиологическим показателям чрезвычайно важно. Водным путем могут передаваться кишечные инфекции — холера, брюшной тиф и паратифы, сальмонеллез, дизентерия, гепатит А, полиомиелит, а также лептоспирозы, сибирская язва, туляремия, туберкулез, сап, Ку-лихорадка, различные грибковые заболевания. В связи с этим основной целью санитарно- микробиологического исследования воды является определение наличия в воде патогенной и условно-патогенной микрофлоры, и, следовательно, источника этого попадания, а также предупреждение распространения инфекционных заболеваний среди населения.
Санитарно-микробиологическое исследование воды проводится в следующих случаях:
1) при выборе источника централизованного хозяйственно- питьевого водоснабжения и периодическом контроле этого источника;
2) при контроле эффективности обеззараживания питьевой воды централизованного водоснабжения;
3) при наблюдении за подземными источниками централизованного водоснабжения, за такими как артезианские скважины, почвенные воды и т. д.;
4) при определении состояния и степени пригодности воды источников индивидуального водопользования (колодцев, родников и т.д.);
5) при наблюдении за санитарно-эпидемиологическим состоянием воды открытых водоемов: водохранилищ, прудов, озер, рек;
6) при контроле эффективности обеззараживания воды плавательных бассейнов;
7) при проверке качества и степени очистки сточных вод;
8) при определении очага водных вспышек инфекционных болезней.
Все санитар но-микробиологические исследования воды регламентируются соответствующей НТД (табл.2 ).
Таблица 2
Перечень нормативно-технической документации по санитарно- микробиологическому контролю воды
|
Продолжение таблицы 2
|
При санитарно-микробиологическом исследовании воды определяются различные показатели в зависимости от поставленной задачи и характера исследуемого объекта (табл. 3)
Таблица 3
|
Продолжение таблицы 3
|
Методы санитарно-микробиологического исследования воды
Отбор проб воды Важным правилом является соблюдение стерильности: забор воды
Достоверность получаемых результатов и выводов зависят от правильности забора проб. Вода для санитарно-бактериологического анализа забирается в объеме 0,5 л в стеклянные бутыли или флаконы, закрытые ватно-марлевыми пробками и завязанные сверху бумажными колпачками. При необходимости исследования воды на присутствие возбудителей кишечных инфекций количество воды увеличивают до 2,5 л.
Для взятия проб воды из глубины (открытых водоемов, колодцев, бассейнов и т. д.) используют специальные приборы: батометр, приборы Исаченко, Рутнера и др. Батометр представляет собой металлический каркас длиной 0,5—1 м (рис.6). Каркас изготавливается из металла, не подвергающегося коррозии, и может компактно складываться, так как состоит из отдельных колец. Дно каркаса свинцовое и служит грузилом. Внутрь устанавливают стерильную бутыль, закрытую стерильной резиновой или корковой пробкой с кольцом, к которому привязана веревка. При погружении в воду на необходимую глубину, потягивая за веревку, пробку открывают, сосуд заполняется водой, о чем свидетельствует прекращение появления пузырьков воздуха на поверхности воды. Веревку опускают, бутыль автоматически закрывается. После извлечения батометра притертую пробку заменяют стерильной ватной (которая должна быть завернута в бумагу и находиться в комплекте с батометром).
Для взятия проб с большой глубины (более 30 м) можно использовать приборы Исаченко, Рутнера, Романенко-Младова.
При отсутствии батометров пробу воды можно отбирать с помощью бутыли, в пробку которой монтируют две стеклянные трубки, соединенные резиновым шлангом. Одна трубка длинная и доходит до дна бутыли, другая -короткая. К резиновому шлангу привязывают веревку. Бутыль на тросе опускают в водоем и на заданной глубине, дернув за веревку, снимают резиновую перемычку со стеклянных трубок, вода начинает поступать в длинную трубку, а через короткую выходит воздух. После отбора пробы, бутыль вынимают из водоема, тут же закрывают ватными пробками отверстия стеклянных трубок и отправляют на исследование.
Для взятия проб питьевой воды используют склянки емкостью 0,5—1 л. При взятии проб воды из кранов, их предварительно обжигают пламенем горящего ватного тампона, смоченного спиртом, затем полностью открывают и в течение 10 мин воду спускают. Воду наливают в бутыли с соблюдением стерильности, не смачивая горлышко, чтобы не допустить замачивания пробки. Родниковую воду берут непосредственно из струи или из середины текущего родника, на расстоянии 10- 15 см от поверхности и дна. Артезианскую и колодезную воду забирают на глубине 10—15 см от поверхности воды. Из проруби пробы отбирают на глубине 10—15 см от нижнего края льда. Из открытых водоемов, как правило, берут серию проб на разном удалении от берега на различной глубине с учетом места водозабора и движения воды.
Лед, используемый на пищевых предприятиях и в хранилищах, также подвергается санитарно-микробиологическому исследованию. Для анализа берут кусок льда не менее 2 кг, в лаборатории его обмывают стерильной водой и стерильными инструментами из глубины вырубают несколько кусочков так, чтобы общая масса была около 500 г. Лед помещают в стерильную посуду и оставляют при комнатной температуре, после растаивания исследуют как воду.
Пробы сточных вод также забирают в стерильные бутыли. Однако объем каждой пробы может колебаться от 500 до 10 мл в зависимости от места взятия (при проверке отдельных этапов очистки, после обработки, перед сбросом в водоем) и от задач анализа.
Хранение и транспортировка проб воды
Все взятые для исследования пробы воды пронумеровываются, в сопроводительном документе должно быть указано: наименование водоема, водоисточника, его местонахождение; описание места отбора проб (для водоемов — расстояние от берега и глубина), близость источников загрязнения, быстрота течения, метеорологические условия — температура воды, воздуха, наличие осадков, ветра, волн и т. д.; дата взятия пробы (час, число, месяц, год), цель исследования. Сопроводительный документ подписывается лицом, бравшим пробу, с указанием его должности.
Транспортировать воду следует в сумках-холодильниках или в ящиках с термоизолирующей прокладкой (температура в которых не более 1—2°С), предохранять от резких толчков (чтобы не замочить пробки), замерзания, действия солнечных лучей.
Исследование воды должно быть проведено не позднее 2 ч с момента отбора пробы, _лишь в виде исключения допускается хранение пробы до 6 ч при температуре 4-5 °С. При более длительном и неправильном хранении может наступить размножение или гибель микрофлоры.
Доставленные пробы воды регистрируют в специальном журнале с пронумерованными и прошитыми страницами.
Определение числа сапрофитных микроорганизмов
К сапрофитным микроорганизмам, населяющим водоемы, относятся мезофильные аэробы и факультативные анаэробы, способные на питательной среде образовывать колонии, видимые при увеличении в 2-5 раз. Количество микроорганизмов, вырастающих в виде колоний, соответствует степени загрязнения воды органическими веществами, что характеризует состояние воды. Поэтому общее количество сапрофитных микробов следует рассматривать как существенный косвенный показатель санитарного состояния воды.
Определение общего микробного числа воды можно проводить методом серийных десятикратных разведений с посевом на мясопептонный агар (МПА) и методом прямого микроскопического подсчета микроорганизмов в исследуемой воде.
При определении первым методом посевы выращивают в зависимости от цели исследования при температуре 37° С в течение 24 ч, или при 20-22°С -48 ч, или при обоих температурных режимах параллельно. Например, при выборе нового источника водоснабжения определяют две группы сапрофитов: 1) вырастающих при температуре 20-22 °С в течение 48 ч, 2) вырастающих при 37°С в течение 24 ч. При температуре 20°С вырастает большее количество сапрофитов и именно они являются наиболее активными участниками процесса самоочищения водоема. В местах большого загрязнения сточными водами численное значение обеих групп сапрофитов близко, поэтому динамика численности этого показателя считается чувствительным индикатором загрязнения водоемов, особенно органическими веществами. При определении числа сапрофитов при двух температурных режимах делают параллельно каждый посев на 2 чашки Петри со средой (в двух повторностях). Объем воды для посева выбирают с таким расчетом, чтобы на чашках выросло не менее 20, но не более 300 колоний (табл. 4). Перед посевом пробы тщательно перемешивают, затем готовят 10-кратные разведения (при сильном загрязнении). Засев каждого разведения- в количестве 1 мл глубинным способом.
После инкубации (при 20 и 37°С) подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности среды, так и в глубине ее. При прямом подсчете с обратной стороны дна чашки
карандашом по стеклу отмечают каждую подсчитанную колонию (чтобы не учесть ее дважды).
Таблица 4
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Если на агаре в чашках выросло много колоний (более 300) или они расплывчатые, а анализ нельзя повторить, то подсчет можно вести при помощи специальных камер или прибора для счета колоний (рис 7). Этот прибор значительно облегчает подсчет, так как он ведется с помощью лупы, дающей увеличение колоний в 2 раза, что ускоряет работу и упрощает процесс определения количества колоний. Аппарат состоит из металлического корпуса, на верхней части которого находится круглая пластинка из термостойкого матового стекла с нанесенной на нем сеткой. Под стеклом вмонтирована
Подсчет колоний ведется с помощью электропера авторучки, соединенной с автоматическим счетчиком. При каждом надавливании на ручку (в момент нанесения на обратной стороне дна чашки точки пером в месте нахождения колоний) при электроконтакте на автоматический счетчик поступает импульс, что регистрируется появлением очередной цифры на табло счетчика.
Конечный результат — ОМЧ — рассчитывают по формуле:
омч-^ (3)
V
где ОМЧ — общее микробное число, колонийобразующих единиц (КОЕ) микроорганизмов в 1 мл исследуемой воды;
К- количество колоний на чашке Петри;
Р- фактор разведения;
V- объем, засеваемый на чашку, мл.
электрическая лампочка, которая освещает сетку. Чашка с посевом, помещенная на стекло, снизу подсвечивается.
Вычисляют среднеарифметическую величину для каждого разведения (при засеве на 2 и более чашки Петри параллельно). Если колоний выросло так много, что они не поддаются счету, или наблюдается рост расплывчатых колоний по всей поверхности агара, то в результате отмечают «сплошной ползучий рост».
Прямой микроскопический метод определения общего количества микроорганизмов
Этот метод впервые был предложен в 1932 г. А.С. Разумовым. Сущность метода заключается в концентрации бактерий на мембранных фильтрах (при пропускании через них исследуемой воды), последующем окрашивании эритрозином и микроскопировании.
Прямой метод удобен тем, что результат, т. е. количество микроорганизмов в 1 мл воды, может быть получен в течение нескольких часов. Поэтому рекомендуется использовать прямой метод, если необходимо дать быструю санитарную оценку воды: при оценке процесса естественного самоочищения водоемов, при оценке эффективности работы очистных сооружений на всех этапах и т.д. Для фильтрования воды используют мембранные фильтры, фильтр Зейтца (рис.8) или специальный аппарат Долгова- Разумова. Мембранные фильтры — тонкие (0,1-0,5 мм) круглые пластинки из нитроклетчатки или ацетилцеллюлозы диаметром 35 мм. В зависимости от размера пор различают фильтры марки Ф (фильтрующие): № 1 — 350 нм; № 2 — 500нм; № 3 — 700 нм; № 4 -900нм;№5 -1200 нм.
Затем мембранный фильтр с окрашенными микроорганизмами высушивают и помещают на предметное стекло, предварительно капнув каплю иммерсионного масла на стекло и на фильтр, который накрывают тонким покровным стеклом. Микроскопируют с иммерсионным объективом, в окуляр вкладывают сетчатый микрометр, разделенный на мелкие квадраты. Подсчитывают микроорганизмы в 20 полях зрения (в каждом поле зрения в 4 маленьких квадратах, расположенных по диагонали). Расчет общего количества бактерий в 1 мл. (X) ведется по формуле:
X = S—N—10‘, (4)
s,v
где S -фильтрующая площадь прибора (мм2); 10б — переводной коэффициент квадратных миллиметров в квадратные микрометры;
N — среднее количество бактерий в одном квадрате; S] — площадь квадрата окулярного микрометра (мкм2); V- объем профильтрованной воды (мл).
Определение бактерий группы кишечных палочек
Понятие «бактерии группы кишечных палочек» включает различных представителей семейства Enterobacteriaceae: родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella и др. По нормативной документации к БГКП относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37°С в течение 5—24 ч (приложение 3, табл. 3.1). По международной классификации такие микроорганизмы относят к общим колиформным бактериям (ОКБ). Они попадают в окружающую среду, в том числе и в воду, с испражнениями человека и животных, поэтому обнаружение их свидетельствует о фекальном загрязнении и эпидемической опасности в отношении кишечных инфекций.
БГКП (ОКБ) можно определять двумя методами: методом мембранных фильтров и титрационным (бродильным) методом.
Исследование воды методом мембранных фильтров. Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической среде и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.
Перед употреблением мембранные фильтры проверяют на отсутствие трещин, отверстий, пузырей и кипятят в дистиллированной воде в течение 10 мин (при этом нельзя допускать скручивания фильтров). Для полного удаления из фильтров остатков растворителей, которые применяются при их изготовлении, кипячение следует повторить 3-5 раз со сменой дистиллированной воды. Подготовленные таким образом фильтры сохраняются в банках с дистиллированной водой или в сухом виде. В день постановки опыта фильтры повторно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде в течение 10 мин.
Фильтрование производят с помощью специальных приборов или фильтра Зейтца ). Перед посевом воды аппарат стерилизуют фламбированием. После остывания на фильтровальный столик, на котором расположена сетка, стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр, прижимают его воронкой или металлическим цилиндром и плотно закрепляют специальными винтами. Отросток колбы, в которую фильтруется вода, с помощью резиновой трубки соединяют с водоструйным или масляным насосом для создания вакуума в приемном сосуде (около 0,25 атм).
Объем воды для посева выбирают с учетом таблицы 4, он должен быть таким, чтобы на фильтре выросло не более 30 изолированных колоний. Рекомендуемый объем питьевой воды — 300мл. Исследуемую воду каждого объема фильтруют не менее чем через 2 фильтра.
В воронку или стакан наливают необходимые объемы воды, начиная с меньших, а затем большие, каждый раз меняя фильтры. Самый меньший объем воды — 1 мл — следует фильтровать через фильтр, предварительно смоченный стерильной водой. После фильтрования верхнюю часть прибора снимают и фильтр осторожно (при сохранении вакуума для удаления излишка влаги на фильтре) стерильным пинцетом переносят на среду Эндо в чашку Петри. Фильтр накладывают вверх поверхностью, на которой осели бактерии, избегая появления пузырьков воздуха между фильтром и средой. На одну чашку можно разместить 4 фильтра, под каждым на дне чашки следует надписать объем воды, номер пробы и число. Если вода мутная, то фильтрование ведется сразу через два фильтра: предварительный фильтр № 6 (для задержания крупных частиц) помещают на фильтр № 2. После фильтрования оба фильтра переносят на среду Эндо. Чашки с фильтрами помещают в термостат и инкубируют при температуре 37° С в течение 24 ч. При окончательном результате учитывают колонии, выросшие на обоих фильтрах.
При наличии в воде БГКП (ОКБ) на фильтрах появляется рост типичных для этих бактерий колоний: темно-красные с металлическим блеском или красные, розовые с красным центром, имеющие четкий отпечаток на обратной стороне фильтра. Бактерии из таких колоний окрашивают по Граму и микроскопируют. Окраску по Граму можно заменить на тест Грегерсена (приложение 3). С культурой грамотрицательных бактерий лактозополо-жительных колоний ставят оксидазный тест (приложение 3) для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от Pseudomonadaceae (последние являются оксидазообразующими бактериями). Оставшуюся часть оксидазоотрицательной Гр(-) изолированной колонии засевают в пробирку с полужидкой лактозной средой и инкубируют при 37°С, 48 ч. При появлении кислоты и газа за более короткий промежуток времени, результат считают положительным.
Индекс ОКБ (БГКП) рассчитывают по формуле:
К • 1000 , (5)
индекс = ———————-
V
где К- количество проверенных на принадлежность к ОКБ (БГКП) колоний на фильтрах;
V- объем профильтрованной воды через фильтры, на которых велся учет.
Например, профильтровано по 100 мл в трех повторностях, на одном фильтре выросло 5 колоний, на другом — 2, на третьем — нет роста.
Индекс ОКБ будет равен: :300 = 23 КОЕ (колонийобразующих единиц). Для перевода индекса в титр используют формулу (1), для рассмотренного случая: Титр=1000:23=43,5мл. В соответствии с ГОСТ, у воды питьевой
индекс ОКБ должен быть не более 3, у воды плавательного бассейна — не более 10.
Метод мембранных фильтров является современным, точным, менее трудоемким и более дешевым в сравнении с титрационным методом. Он удобен и тем, что позволяет концентрировать бактерии, содержащиеся в значительном объеме воды на небольшой поверхности фильтра. Однако одним из самых существенных недостатков метода является то, что этим методом выявляется меньшее количество бактерий в сравнении с титрационным. Для большей точности рекомендуется исследование воды проводить параллельно обоими методами.
Титрационный метод исследования воды. Метод основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую питательную среду, с последующим пересевом на дифференциально-диагностическую среду и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам.
Объем засеваемой воды зависит от характера исследуемого объекта, но обязательно посев ведется в 2-3, а в некоторых случаях- в 5-ти повторностях.
Объемы воды выбирают с таким расчетом, чтобы в одном из разбавлении получить хотя бы один отрицательный результат. (табл. 5).
Таблица 5
Схема посева воды из различных объектов при работе титрационным методом
| Объект исследования | Объемы засеваемой воды (в мл) для определения | |
| БГКП, ЛПК, Е. coli | энтерококков | |
| Вода питьевая
централизованного водоснабжения |
3 повторности по 100,10,1 | 2 или 3 повторности по 100, 10, 1 |
| Вода нецентрализованного водоснабжения и плавательных бассейнов | 50, 5 повторностей по 10, 1 или 2 повторности по 100, 10, 1 и 0,1 | 2 или 3 повторности по 100, 10, 1 |
| Водные объекты, не загрязняемые сточными водами | 50, 5 повторностей по 10, 1 или 2—3 повторности по 10; 1; 0,1; 0,01 | 50,5
повторностей по 10, 1 или 2-3 повторности по 10; 1;0,1; 0,001 |
Продолжение таблицы 5
|
Посев воды производится в глкжозопептонную среду (ГПС): 100 мл воды — в 10 мл концентрированной среды, 50 мл — в 15 мл концентрированной среды, 10 мл — в 1 мл также концентрированной среды; 1 мл и последующие разведения — в 10 мл глюкозопептонной среды нормальной концентрации. Большие объемы воды засеваются во флаконы или колбы, меньшие — в пробирки. Посевы инкубируют в термостате в течение суток при температуре 37°С.
Из пробирок с посевами, в которых наблюдается помутнение (а также образование кислоты и газа), делают высев на сектора в чашки со средой Эндо. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 16-18 ч. При наличии на среде Эндо характерных для БГКП (ОКБ) колоний (красных с металлическим блеском) следует провести все тесты, перечисленные выше. Положительный ответ на наличие БГКП дается в том случае, если наблюдается рост характерных колоний, образованных оксидазоотрицательными, Гр(-) бактериями, сбраживающих лактозу при 37°С с образованием кислоты и газа. Обращают внимание также на отпечаток, окрашенный в красный цвет, на среде после снятия изучаемой колонии. Таким образом, положительный ответ выдается через 40—42 ч. Так же, как и при определении БГКП методом мембранных фильтров, если на среде Эндо выросли лактозоотрицательные колонии (розовые, бесцветные, мелкие красные), то их принадлежность к БГКП (ОКБ) подтверждается отрицательной окраской по Граму, отрицательным оксидазным тестом, способностью ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С и отсутствием протеолитической активности (при посеве на среду Эндо с молоком).
Результат выражается в виде индекса (титра) БГКП или ОКБ, цифровое выражение которых определяют по таблице 6.
| Таблица 6
Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 1л воды
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||