• Федеральный закон 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения»
  • ГОСТ 24104-88 «Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия»
  • ГОСТ 28498-90 «Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний»
  • ГОСТ 4233-77 «Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия»
  • ГОСТ 6709-72 «Вода дистиллированная. Технические условия»
  • ГОСТ 10444.15-94 «Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов»
  • ГОСТ 10444.1-84 «Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе»
  • ГОСТ 10444.2-94 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества Staphylococcus aureus»
  • ГОСТ 10782-85 «Бутылки стеклянные для крови, трансфузионных и инфузионных препаратов. Технические условия»
  • ГОСТ 13739-78 «Масло иммерсионное для микроскопии. Технические требования. Методы испытаний»
  • ГОСТ 13805-76 «Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия»
  • ГОСТ 17206-96 «Агар микробиологический. Технические условия»
  • ГОСТ 1770-74 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия»
  • ГОСТ 18300-87 «Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия»
  • ГОСТ 19569-89 «Стерилизаторы паровые медицинские. Общие технические требования и методы испытаний»
  • ГОСТ 245-76 «Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия»
  • ГОСТ 2493-75 «Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия»
  • ГОСТ 25336-82 «Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры»
  • ГОСТ 25706-83 «Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования»
  • ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов»
  • ГОСТ 26670-91 «Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов»
  • ГОСТ 26972-86 «Зерно, крупа, мука, толокно для продуктов детского питания. Методы микробиологического анализа»
  • ГОСТ 3118-77 «Реактивы. Кислота соляная. Технические условия»
  • ГОСТ 3164-78 «Масло вазелиновое медицинское. Технические условия»
  • ГОСТ 4145-74 «Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия»
  • ГОСТ 4172-76 «Реактивы. Натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный. Технические условия»
  • ГОСТ 4198-75 «Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия»
  • ГОСТ 4209-77 «Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия»
  • ГОСТ 4217-77 «Реактивы. Калий азотнокислый. Технические условия»
  • ГОСТ 4328-77 «Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия»
  • ГОСТ 5556-81 «Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия»
  • ГОСТ 5821-78 «Реактивы. Кислота сульфаниловая. Технические условия»
  • ГОСТ 5962-67 «Спирт этиловый ректификованный. Технические условия»
  • ГОСТ 6038-79 «Реактивы. D-глюкоза. Технические условия»
  • ГОСТ 61-75 «Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия»
  • ГОСТ 6824-96 «Глицерин дистиллированный. Технические условия»
  • СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами»

МУК 4.2.801-99Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции

Государственная сист ема санитарно-эпидемиологического _нормирования Российской Федерации_

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции

Методические указания МУК 4.2.801—99

Издание официальное

Минздрав России Москва • 2000

ББК 51.204.1 М54

М54 Методы микробиологического контроля парфюмерно-косметической продукции: Методические указания.—М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000.—35 с.

ISBN 5-7508—0198 -5

1. Разработаны: Федеральным цсшром luccainnwuiitciopa Минздрава России (Подунова Л. Г., Кривопалова Н. С., Chpcjniaiall.lv.), Научно-про из в оде шейным центром «Гидробиос» Федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при Минздраве России (Герасимова Г. А., Синилов С. К.. Ьуюна Л. I Кринкам И В.), I 1аучно-исследова!ельским инсплугом медицины труда РАМИ (11|мхвстова Н. К., Александрова Л. 3., Иванова Л. А., Фролова Я А )

2. Утверждены и введены в дсйсшис Главным rocyjcapci венным санитарным врачом Российской Федс|пщии Первым заместителем минисфа здравоохранения Российской Федерации 27 декабря 1999 г.

3. Введены впервые.

1>1″К 51.204.1

ISBN 5-7508—0198-5

С Федеральный нетр I носам шндиал три Мшпдраии России, 200(1

МУК 4.2.801—99

Полученное среднее арифметическое число колоний округляют следующим образом:

• если число меньше 100 — его округляют до ближайшего числа, кратного 5;

• если число больше 100 и его последняя цифра 5 — его округляют до ближайшего числа, кратного 20;

• если число больше 100 и его последняя цифра не 5 — его округляют до ближайшего числа, кратного 10.

Количество микроорганизмов в 1 г продукта (X) вычисляют по формуле:

X — а • I0N/q$ где

а — округленное среднее арифметическое число колоний;

q объем посевного материала, внесенного в чашку, см3;

N — степень десятикратного разведения продукта.

Результаты анализа выражаются числом от 1,0 до 9,9, умноженным на 10N, где N — соответствующая степень десятикратного разведения продукта.

Если на чашках с разведением 1:10 не обнаружено роста бактерий, то результат записывают так: менее 1,0- 101 клеток на 1 г (см3).

Если на чашках выросло более 300 колоний, то посевы повторяют, используя более высокие разведения продукта.

4.2. Определение количества дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов

4.2.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии, на селективной агаризованной питательной среде Сабуро, при культивировании посевов при температуре (30 ± 1) °С в течение (120 ±3) ч.

4.2.2. Проведение анализа

Для определения количества дрожжей и плесневых грибов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 150 колоний для дрожжей и не менее 5 и не более 50 — для плесеней.

Посев осуществляют глубинным или двухслойным агаровым методами.

11

4.2.2.1. Метод глубинного посева По I см* исследуемого материала из разведений, приготовленных по п. 3.2.1.3, высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки. Не позже чем через 15 мин после внесения материала его заливают 15—20 см3 предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1)°С агаризованной среды Сабуро по п. 6.4.8. Чашки с посевами, залитыми питательной средой, осторожно вращают, чтобы посевной материал равномерно распределился но всей питательной среде. Затем чашки с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды.

После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (30 ± 1) °С в течение (120 ±3) ч.

4.2.2.2. Двухслойный агаровый метод По 1 см3 исследуемого материала из разведений, приготовленных по п. 3.2.1.3, вносят в каждую из двух пробирок с 4 см3 предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1)°С агаризованной среды Сабуро. Быстро перемешивают содержимое пробирок и переносят в чашки Петри с застывшей агаризованной средой Сабуро, распределяя его равномерно по поверхности среды.

После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (30 +1) °С в течение (120 ±3) ч.

4.2.2.3. Обработка результатов Результаты оцениваются по каждой пробе отдельно.

Просмотр посевов осуществляется каждый день, предварительный учет типичных колоний проводят через (72±3)ч термостатирования посевов, а окончательный — через (120 ±3) ч.

На поверхности плотной среды рост и развитие дрожжей и дрожжеподобных грибов характеризуется появлением плоских или выпуклых колоний белого или кремового, иногда серо-белого цвета. В глубине агара дрожжи образуют чечевицеобразные колонии.

Развитие плесневых грибов характеризуется появлением сметанообразных, слизистых колоний различной окраски с последующим опушением.

Подсчитывают все выросшие колонии, суммируют и находят среднее арифметическое из них.

Допускается учитывать колонии с помощью лупы с 5х увеличением.

МУК 4.2.801—99

Полученное среднее арифметическое число колоний, если необходимо, округляют как описано в п. 4.1.2.3.

Количество дрожжей и плесневых грибов в 1 г (см3) продукта (X) вычисляют по формуле:

X — a 10N/q, где

а — округленное среднее арифметическое число колоний;

q — объем посевного материала, внесенного в чашку, см3;

N — степень десятикратного разведения продукта.

Результаты анализа выражаются числом от 1,0 до 9,9, умноженным на 10N, где N — соответствующая степень десятикратного разведения продукта.

Если на чашках с разведением 1 :10 не обнаружено роста дрожжей и плесневых грибов, то результат записывают так: «не обнаружены».

Если на чашках выросло более 150 колоний, то посевы повторяют, используя более высокие разведения продукта.

4.3. Выявление и идентификация бактерий сем. Enterobacteriaceae

К семейству Enterobacteriaceae относятся грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную окси-дазную реакцию, ферментируют глюкозу с образованием кислоты и восстанавливают нитраты в нитриты.

4.3.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении бактерий семейства Enterobacteriaceae с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выявленных бактерий по нижеследующим биохимическим тестам.

4.3.2. Проведение испытания

10 см3 исследуемого материала из разведения 10-‘, приготовленного по п. 3.2.1.3, вносят в стеклянный флакон вместимостью 200 см3, содержащий 100 см3 одной из питательных сред по п. 6.4.9. Смесь перемешивают и инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24—48 ±3)ч.

При наличии признаков роста на средах накопления (помутнение среды, изменение ее цвета) делают пересев петлей на чашки Петри со средой Эндо (п. 6.4.10.1). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24—48 ±3) ч.

На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии круглые, малиновые с металлическим блеском или без него, розовые, бесцветные, блестящие, выпуклые, диаметром 1—4 мм.

13

При окраске по Граму наблюдаются грамотрицательные неспоро-образующие палочки.

При отсутствии роста на среде Эндо типичных для семейства Enterobacteriaceae колоний считают, что в образце нет представителей данного семейства.

Колонии, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на одну из скошенных сред по п. 6.4.7. Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С в течение (24 ±3) ч. Культуры проверяют на чистоту.

Чистые культуры исследуют на наличие фермента цитохромо-ксидазы, для чего полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом на обнаружение цитохромоксидазы (п. 6.4.6) и наносят бактериологической петлей или стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий. Синее окрашивание, появляющееся через 2—5 мин, свидетельствует о положительной оксидазной реакции.

При отрицательной оксидазной реакции культуры пересевают петлей на среду для определения ферментации глюкозы по п. 6.4.10.2 (допускается использование O/F-теста) и в среду для определения способности восстанавливать нитраты в нитриты по п. 6.4.10.3.

В половину пробирок со средой для определения ферментации глюкозы вносят по 0,5 см3 стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С в течение (24 ±3) ч. При наличии роста ферментацию глюкозы устанавливают по изменению цвета среды из красного в желтый в пробирках с маслом и без него.

При проведении O/F-теста посев производят уколом в два столбика со средой Хью-Лейфсена по п. 6.4.10.4, один из которых заливают 1 см3 стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при (37±1)°С в течение (24±3)ч. При положительной реакции происходит изменение цвета среды при культивировании как в аэробных, так и в анаэробных условиях.

О наличии нитритов в среде судят по появлению красного окрашивания при внесении в среду реактива Грисса (п. 6.4.5). Для чего к суточной исследуемой культуре на среде для определения наличия нитритов приливают 0,2—0,3 см3 реактива Грисса, погружая пипетку до дна пробирки. Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.

МУК 4.2.801—99

4.3.3. Обработка результатов

Если в исследуемом образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную окси-дазную реакцию, ферментируют глюкозу с образованием кислоты и восстанавливают нитраты в нитриты, это значит, что парфюмернокосметическое средство контаминировано бактериями сем. Entcro-bacteriaceae.

4.4. Выявление и идентификация Pseudomonas aeruginosa

Микроорганизмы вида Pseudomonas aeruginosa представляют собой грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию, образуют проникающий в субстрат пигмент феназинового ряда, имеющий буроватый оттенок с вариантами от сине-зеленого (пиоцианин) до коричнево-красного, и способны к росту при температуре (42 ± 1) °С.

4.4.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении бактерий вида Pseudomonas aeruginosa с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выявленных бактерий по нижеследующим биохимическим тестам.

4.4.2. Проведение испытании

10 см3 исследуемого материала из разведения 101, приготовленного по п. 3.2.1.3, вносят в стеклянный флакон вместимостью 200 см3, содержащий 100 см3 одной из питательных сред по п. 6.4.11. Смесь перемешивают и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24 -48 ±3) ч.

При наличии признаков роста в среде накопления делают пересев петлей на чашки с одной из питательных сред но п. 6.4.7. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (24—48 ±3) ч.

При наличии роста зеленоватых, флюоресцирующих колоний, обладающих характерным запахом и окрашивающих среду, из них делают мазки и окрашивают по Граму.

Колонии, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на одну из скошенных сред по п. 6.4.7. Посевы инкубируют при (37 ± I) °С в течение (24 ±3) ч. Культуры проверяют на чистоту.

Чистые культуры колоний исследуют на наличие цитохромо-ксидазы. Для чего полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом на обнаружение цитохромоксидазы (п. 6.4.6) и наносят

15

бактериологической петлей или стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий. Синее окрашивание, появляющееся через 2—5 мин, свидетельствует о положительной окси-дазной реакции.

Оксидазоположитсльные колонии пересевают петлей на среду Кинг-А (п. 6.4.12) и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24—48 ±3) ч.

На среде Кинг-А культура Pseudomonas aeruginosa образует пигмент феназинового ряда, имеющий буроватый оттенок с вариантами от сине-зеленого (пиоцианин) до коричнево-красного и проникающий в субстрат.

Для дополнительного подтверждения принадлежности в виду Pseudomonas aeruginosa чашки со средой Кинг-А инкубируют при температуре (42 ± 1) °С в течение (24 ±3) ч.

Культура Pseudomonas aeruginosa растет в вышеуказанных условиях с образованием сине-зеленого пигмента.

4.4.3. Обработка результатов Если в результате исследований обнаружены колонии грам-отрицательных неспорообразующих палочек, дающих положительную оксидазную реакцию, образующие пигмент или без него и дающие рост при 42 °С, считают, что парфюмерно-косметическое средство контаминировано Pseudomonas aeruginosa.

4.5. Выявление и идентификация Staphylococcus aureus

Микроорганизмы вида Staphylococcus aureus представляю! собой грамположительные кокки, обладающие лецитиназной активностью, сбраживающие маннит в аэробных и анаэробных условиях или мальтозу в анаэробных условиях и дающие положительную реакцию плазмокоагуляции.

4.5.1. Сущность метода Метод основан на выявлении бактерий вида Staphylococcus aureus с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выявленных бактерий по нижеследующим биохимическим тестам.

4.5.2. Проведение испытаний 10 см1 исследуемого материала из разведения 10*1, приготовленного по п. 3.2.1.3, вносят в стеклянный флакон вместимостью 200 см1, содержащий 100 см1 одной из сред, приготовленных по п. 6.4.13. Смесь перемешивают и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24 ±3) ч.

МУК 4.2.801—99

1. Общие положения……………………………………………………………………..4

2. Нормативные ссылки…………………………………………………………………5

3. Методы отбора и подготовки проб для микробиологического анализа………………………………………………………………..5

3.1. Отбор проб…………………………………………………………………………5

3.2. Подготовка проб к анализу…………………………………………………6

4. Методы анализа………………………………………………………………………..9

4.1. Определение общего количества мезофильных

аэробных и факультативно-анаэробных бактерий…………………………9

4.2. Определение количества дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов……………………………………………………..11

4.3. Выявление и идентификация бактерий сем. Entero-

bakteriaceae……………………………………………………………………………………13

4.4. Выявление и идентификация Pseudomonas

aeruginosa……………………………………………………………………………………….15

4.5. Выявление и идентификация Staphylococcus

aureus………………………………………………………………………………………….16

4.6. Испытание на стерильность……………………………………………….18

5. Микробиологические нормативы для парфюмернокосметической продукции……………………………………………………………20

6. Аппаратура, растворы реактивов, питательные

среды…………………………………………………………………………………………..22

6.1. Аппаратура……………………………………………………………………….22

6.2. Питательные среды и реактивы…………………………………………22

6.3. Материалы………………………………………………………………………..24

6.4. Приготовление растворов реактивов и питательных сред………………………………………………………………………………..25

Список литературы……………………………………………………………………..35 1

УТВЕРЖДАЮ Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Первый заместитель министра здравоохранения Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

27 декабря 1999 г.

МУК 4.2.801—99

Дата введения — с момента утверждения

4. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методы микробиолотческого контроля парфюмерно-косметической продукции

Методические указании МУК 4.2.801—99

1. Общие положения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для обеспечения контроля качества парфюмерно-косметических изделий по микробиологическим показателям, введенным СанПиН 1.2.631—97 «Гитеническис требования к производству и безопасности парфюмернокосметической продукции», и устанавливают методы лабораторных испытаний качества парфюмерно-косметической продукции по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимых в порядке производственного контроля, государственного санитарно-эпидемиологического надзора и при испытании указанной продукции в целях сертификации соответствия.

Издание официальное Настоящие методические указания нс

могуз бьпъ полностью или чаежчно воспроизведены, тиражированы и распространены без разрешения Минздрава России.

МУК 4.2.801—99

1.2. Методические указания предназначены для использования в аккредитованных бактериологических производственных, испытательных лабораториях и лабораториях организаций государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации и позволяют проводить контроль на соответствие СанПиН 1.2.631—97 «Гигиенические требования к производству и безопасности парфюмерно-косметической продукции».

1.3. Данный документ разработан в связи с необходимостью унификации и усовершенствования методов микробиологического анализа парфюмерно-косметической продукции.

Методы адаптированы к условиям работы лабораторий, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмернокосметической продукции.

1.4. Настоящие методические указания должны учитываться при пересмотре действующей и разработке вновь создаваемой нормативной документации на парфюмерно-косметическую продукцию.

2. Нормативные ссылки

2.1. Закон Российской Федерации «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30.03.99 № 52-ФЗ.

2.2. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 15.06.94 № 625.

2.3. Положение о государственной санитарно-эпидемиологической службе РФ, утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации от 30.06.98 № 680.

3. Методы отбора и подготовки проб для микробиологического анализа

3.1. Отбор проб

3.1.1. При отборе проб следует руководствоваться требованиями ГОСТ 29188.0-91 «Парфюмерно-косметические изделия. Правила приемки, отбор проб, методы органолептических испытаний» и ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических анализов».

3.1.2. Пробы парфюмерно-косметических изделий для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физикохимических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, для того чтобы исключить вторичное микробное загрязнение продукта.

5

3.1.3.0т каждой партии парфюмерно-косметических изделий, подлежащих контролю, следует брать не менее трех единиц изделий в потребительской таре (упаковке), которая не должна иметь следов повреждений.

3.1.4. При испытаниях на стерильность от каждой партии парфюмерно-косметических изделий, независимо от ее объема, отбирают 10 ампул или 10 других единиц упаковки.

3.1.5. Пробу, отобранную от отдельной единицы упаковки, называют разовой. Количество продукта в разовых пробах из каждой единичной упаковки должно быть одинаковым. Разовые пробы соединяют, перемешивают и составляют среднюю пробу.

3.2. Подготовка проб к анализу

3.2.1. Подготовка проб для определения микробиологической чистоты

3.2.1.1. Перед вскрытием упаковки место соединения крышки с тарой обрабатывают 70 %-ным раствором этилового спирта. Первую порцию в количестве примерно 10% содержимого упаковки отбрасывают, затем отбирают пробы и переносят в стерильную колбу или флакон вместимостью 100—200 см3.

3.2.1.2. Для испытания готовят среднюю пробу не менее 15 г (см3) из упаковок, отобранных по п. 3.1.3, и состоящую из равных разовых проб. Такое же количество упаковок используют и для повторных испытаний. В случае, если масса (объем) парфюмерно-косметического средства в единичной упаковке менее 5 г (см3), содержимое исследуют полностью или используют большее количество упаковок.

3.2.1.3. (5,0 ±0,1) г (см3) или (10,0 ±0,1) г (см3) средней пробы отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45±1)см3 или (90±1)см3 1 %-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе (п. 6.4.2). Смесь тщательно перемешивают в течение 15—30 мин до полной гомогенизации (либо помещают на аппарат для встряхивания). При необходимости пробы прогревают на водяной бане или в термостате до 40—45 °С, но не более 10 мин. Для гомогенизации продукции, плохо растворимой в воде, используют стеклянные бусы.

Эмульсии типа вода-масло подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе (п. 6.4.2) и предварительно (до встряхивания) продевая на водяной бане или в термостате до 40—45 °С в течение 20 мин.

6

МУК 4.2.801—99

Получают смесь, в Юг (см3) которой содержится 1 г (см3) парфюмерно-косметического средства — первое разведение 1 : 10 (10′). Мри необходимости делают последующие десятикратные 1 : 100 (10 2) и I : 1000 (IО 3) разведения.

3.2.1.4. Полученные разведения используют для посевов. Время с момента окончания подготовки пробы до начала высева нс должно превышать 30 мин.

3.2.1.5. Определение собственной антимикробной активности парфюмерно-косметической продукции.

Метод основан на подавлении роста тест-штаммов микроорганизмов под действием испытуемого парфюмерно-косметического средства. В качестве тест-штаммов используют Bacillus subtilis АТСС 6633 (или Bacillus cereus АТСС 10702), Escherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (или Pseudomonas aeruginosa ГИСК 453), Staphylococcus aureus АТСС 6538-P и культуру Candida albicans АТСС 885-653.

Определение собственной антимикробной активности проводится для парфюмерно-косметических средств, в состав которых входят консерванты и другие вещества, обладающие антимикробным действием.

Собственная антимикробная активность определяется однократно для каждой конкретной рецептуры парфюмерно-косметического средства.

Культуры Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli. Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus выращивают на одной из жидких сред по п. 6.4.11.1 или п. 6.4.11.2 при температуре (37±1)°С в течение (19±1)ч. Культуру Candida albicans выращивают на жидкой среде Сабуро по п. 6.4.8.1 при температуре (30±1)°С в течение (48 ±3) ч.

Из каждой выросшей культуры готовят взвесь микроорганизмов, добавляя физиологический раствор по п. 6.4.1 в соотношении I : 1000.

В пробирки вносят по 1 см3 первого разведения испытуемой пробы парфюмерно-косметического средства по п. 3.2.1.3 и добавляют:

• в пробирку № 1 — 10 см3 буферного раствора по п. 6.4.16 и 1 см3 взвеси Bacillus subtilis (Bacillus cereus);

• в пробирку №2 — 10см3 буферного раствора по п. 6.4.16 и 1 см3 взвеси Candida albicans;

• в пробирку №3 — 10см3 одной из питательных сред по п. 6.4.9 и 1 см3 взвеси Escherichia coli;

7

• в пробирку №4 — 10см3 одной из питательных сред по п. 6.4.11 и 1 см3 взвеси Pseudomonas aeruginosa;

• в пробирку №5 — 10см3 одной из питательных сред по п. 6.4.13 и 1 см3 взвеси Staphylococcus aureus.

Контролем служат пробирки с питательными средами и соответствующими тест-штаммами, в которые вместо испытуемого парфюмерно-косметического средства вносят то же количество стерильной дистиллированной воды.

Посевы инкубируют при (30 ± 1) °С в течение (48 ±3) ч.

В случае отсутствия роста тест-штаммов микроорганизмов на соответствующих питательных средах отмечают антимикробное действие испытуемого средства.

Для устранения антимикробного действия входящих в состав парфюмерно-косметических средств консервантов или веществ, обладающих антимикробным действием, среднюю пробу в количестве (5,0 ±0,1) г (см3) или (10,0 ±0,1) г (см3) отбирают стерильно и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45 ± 1) см3 или (90±1)см3 4 %-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, или увеличивают разведение испытуемой пробы.

Дальнейшие испытания проводят в соответствии с п. 4.

3.2.2. Подготовка проб к анализу на стерильность

Исиыгаиие парфюмерно-космегических средств на стерильность проводят методом прямого посева или методом мембранных фильтров.

Метод мембранных фильтров не применим для суспензий или гомогенатов парфюмерно-косметических средств, загрязняющих при фильтрации поры фильтров.

3.2.2.1. Перед вскрытием ампулы с парфюмерно-косметической продукцией обрабатываются этиловым спиртом. Шейка ампулы осторожно прогревается в пламени горелки. На хорошо прогретую шейку ампулы капают 1 каплю стерильного физиологического раствора (п. 6.4.1). Ампулы осторожно вскрывают по месту образовавшейся в стекле трещины.

3.2.2.2. Содержимое 10 ампул или 10 других упаковок объединяют в единую пробу. Из объединенной пробы отбирают стерильно (5,0 ±0,1) г (см3) или (10,0 ±0,1) г (см3) парфюмерно-косметического средства.

При испытаниях методом прямого посева отобранные пробы непосредственно засевают в соответствующие питательные среды.

8

МУК 4.2.801—99

При испытаниях методом мембранных фильтров отобранные пробы помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие соответственно (45 ± 1) см3 или (90 ± 1) см3 стерильного 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, предварительно пропущенного через мембранный фильтр с размером пор (0,45 ±0,02) мкм. Пробы тщательно перемешивают в течение 15—20 мин до полной гомогенизации.

При испытании масляных растворов пробы подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе и предварительно (до вегряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до 40—45 °С в течение 20 мин.

4. Методы анализа

При микробиологическом контроле парфюмерно-косметической продукции используют стандартизованные методы микробиологического посева. Определяют следующие группы микроорганизмов: мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы; дрожжи, дрожжеподобные и плесневые грибы; бактерии семейства Enterobacteriaceae; бактерии вида Staphylococcus aureus; бактерии вида Pseudomonas aeruginosa.

В микробиологических лабораториях, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции, допускается применение импедансного метода в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.590—96 «Бактериологические исследования с использованием экспресс-анализатора «Бак Трак 4100», утвержденными 18.11.96. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надоора. Использование прибора «Бак Трак 4100» позволяет сократить время испытаний и получить результат через 6—8 ч после начала исследований. Прибор аттестован и внесен в Государственный реестр (№ 14313-94).

4.1. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий

4.1.1. Сущность метода

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов при культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (30 ± 1) °С в течение (72 ±3) ч и пересчете их количества на 1 г (см3) исследуемого продукта.

9

4.1.2. Проведение анализа Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний.

Посев осуществляют глубинным или двухслойным агаровым методами.

4.1.2.I. Метод глубинного посева По I см3 исследуемого материала из разведений, приготовленных по п. 3.2.1.3, высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки. Не позже чем через 15 мин после внесения материала, его заливают 15—20 см3 одной из сред по п. 6.4.7, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1)°С. Чашки с посевами, залитыми питательной средой, осторожно вращают, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде. Затем чашки с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды.

После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном и термостатируют при температуре (30 ± 1) °С в течение (72 ±3) ч.

4.1.2.2. Двухслойный агаровый метод По 1 см3 исследуемого материала из разведений, приготовленных по п. 3.2.1.3, вносят в каждую из двух пробирок с 4 см3 одной из сред по п. 6.4.7, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45±1)°С. Быстро перемешивают содержимое пробирок и переносят в чашки Петри с застывшей средой, распределяя его равномерно по поверхности среды.

После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном и термостатируют при температуре (30 ± 1) °С в течение (72 ±3) ч.

4.1.2.3. Обработка результатов Просмотр посевов осуществляется каждый день.

Результаты оцениваются по каждой пробе отдельно. Подсчитывают количество колоний на тех чашках, где их выросло от 15 до 300, суммируют и находят среднее арифметическое из них.

Допускается учитывать колонии с помощью лупы с 5х увеличением.


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *